세포 발현과 간섭, 돌연변이 발생

2가지 세포 비교를 통해 세포의 발현 확인은 DNA 마이크로어레이(DNA Microarray)가 대표적이다.

이는 보통 암세포와 정상 세포를 비교하는데 수 만개의 유전자를 한번에 발현시켜서 확인하는 방법이다.

원위치 혼성화(In situ Hybridization)는 특정 세포의 DNA나 RNA 서열을 검출하여 형광 탐침하는 방법이다. (Nucleic acid sequence is localized labeled prove in cell, tissu or isolate.)

단일 클론 항체로 항원 항체 반응을 이용한 단백질 탐침은 SDS-PAGE를 통해 크기별 전기영동으로 항체 표적을 확인한다. (SDS-PAGE는 denature the protein and give it an overall negative charge.)

이는 추가적으로 Antibody를 이용한 웨스턴 블롯팅, 면역 블롯팅을 사용할 수 있다.

면역 침강법(Immunoprecipitation)은 방사성 아미노산과 같이 배양시켜 항원 항체 반응을 확인한다.

Temperture sensitive mutant는 온도에 민감한 단백질을 만들고, Cell cycle을 제어하는 유전자를 확인한다(Gene identification)

유전자 전달(Transfection) 은 Eukaryotic cell DNA 발현확인하는데 사용되며(Experimental introduce of DNA into Eukaryotic), 전기 천공법(Electroporation)은 일시적 발현(Transient expression)으로 DNA가 핵으로 들어가 전사하는 것을 확인한다.

전기 천공은 DNA 이외에 Injection과 Fusion을 추가적으로 사용할 수 있다.

형질전환 동물(Transgenic)은 복제 DNA를 Fertilized egg, 전핵(Pro nucleus)에 주입한다. 이것이 곧 배아줄기세포로 진화하게 되는 것이며, 추가적으로 식물은 Ti Plasmid로 재조합하며 식물체를 형성할 수 있다.(can grown single cultured cell into recombinant DNA)

만약 돌연변이 발생시에는 역유전학(reverse genetics)로 시험관 내 돌연변이 유발(In vitro mutagenesis)를 통해 진핵 생물 유전자 발현과 기능을 확인할 수 있다.

돌연변이에서 상동성 재조합(Homologous recombination)이 대표적으로 있는데, 이는 복제하려는 유전자에서 서열을 바꿔 돌연변이화 하는 것을 의미하는데 이는 Knock Out을 사용한다. (Mutation are introduced into selected gene of living cell.), (Inactivate a gene by altering DNA encoding.)

유전자 발현의 간섭으로는 Antisense가 대표적인데, 이는 단일가닥의 DNA 혹은 상보적 RNA가 mRNA와 혼성화되서 단백질 번역을 막는다.(Single strand antisense bind to complementary DNA and RNA)

RNA 간섭(RNAi)는 이중가닥 RNA가 다이서란 효소때문에 SiRNA로 변하고 SiRNA가 RISC와 복합체가 되어 이중가닥이 분리되며 표적 mRNA를 분해하는 것이 있다. (RISC, Cleave the complementary mRNA)

우성 저해변이(Dominant inhibitory mutant)는 포함된 DNA를 주입하고 정상 유전자 기능을 차단하는 것이다.(Block transcription of normal gene, produce protein that interfere with the function the protein produce.)